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DTA負篩選基因實驗:DTA(Diphtheria Toxin A)負篩選基因是一種常用的遺傳工程工具,主要用于剔除未發生特定重組事件的細胞。這種技術依賴于白喉毒素A鏈(DTA),它能抑制蛋白質合成并導致細胞死亡。在基因打靶實驗中,DTA通常被用來作為負篩選標記,以確保只有那些經歷了正確同源重組的細胞才能存活下來。
藥物誘導基因敲除實驗(如他mo昔芬系統或四環素系統)是在靶基因兩側插入特定重組酶識別位點后,通過給藥定時激活Cre-ER或Tet-On/Tet-Off等重組酶,實現特定器官、特定時間點的高效基因刪除,兼顧全身敲除的che底性與條件性敲除的時空精度,是研究基因功能和藥物靶點驗證的利器。
條件性基因敲除實驗借助Cre/loxP或Flp/FRT系統,只在特定細胞類型或發育階段通過組織特異性啟動子驅動重組酶切除被loxP/FRT環繞的目標基因,從而規避胚胎致死、實現精準時空敲除,是解析基因功能與疾病機制的核心遺傳學工具。
RNA干擾實驗(RNA interference, RNAi)是一種由雙鏈RNA(dsRNA)介導的轉錄后基因沉默現象,通過特異性降解目標mRNA實現基因表達調控。
DNA片段的克隆需要合適的載體,載體或是質粒,或是噬菌體,或是病毒,通常大多經過人工改造。作為載體必須具備兩條件:一是該載體在細胞內必須能自主復制,即必須具備復制原點;二是該載體必須具備適合的酶切位點,且這些酶切位點不在復制原點區域內。以上兩條,保證了載體的可繁殖性和可利用性。為了便于獲得陽隆克隆,載體上常有篩選標記,如對抗菌素的抗性,某些基因產物的顯色反應等。
慢病毒(Lentivirus)載體是以HIV-1(人類免疫缺陷I型病毒)為基礎發展起來的病毒載體。對分裂細胞和非分裂細胞均具有感染能力,可以將外源基因有效地整合到宿主染色體上,從而達到持久性表達。在體外實驗及體內實驗的研究中,慢病毒己經成為表達外源基因或外源shRNA的常用載體形式之一, 并且正在獲得越來越廣泛的應用。
生物信息學(Bioinformatics)是在生命科學的研究中,利用應用數學、信息學、統計學和計算機科學為工具對生物信息進行儲存、檢索和分析的科學。
通過非病毒方法將核酸引入真核細胞的過程定義為轉染。使用各種化學,脂質或物理方法,該基因轉移技術是在細胞背景下研究基因功能和蛋白質表達的有力工具。將外源物質導入細胞的方法主要包括脂質體轉染(瞬時轉染和穩定轉染),電轉或者病毒感染。病毒載體是進行真核細胞基因工程、真核基因轉染的有力工具。